耗材專(zhuān)區(qū) | 應(yīng)用EZsep™HLB固相萃取柱建立化妝品中丙酸氯倍他索的檢測(cè)方法

前言

丙酸氯倍他索是一種抗炎皮質(zhì)類(lèi)固醇，屬于糖皮質(zhì)激素中的一種，具有較強(qiáng)的抗炎、抗瘙癢和毛細(xì)管收縮作用，因此很多三無(wú)化妝品可能會(huì)違規(guī)添加糖皮質(zhì)激素，使用初期由于強(qiáng)大的抗炎功能，使皮膚呈現(xiàn)出一種光滑潔白吹彈可破的狀態(tài)，但長(zhǎng)時(shí)間使用，就開(kāi)始出現(xiàn)紅血絲、爆痘，皮膚敏感等問(wèn)題，繼續(xù)使用會(huì)使皮膚情況越來(lái)越糟糕，停用皮膚情況更糟糕，最終只能求醫(yī)慢慢來(lái)調(diào)整。

本文參照《GB/T 24800.2-2009 化妝品中四十一種糖皮質(zhì)激素的測(cè)定》，利用EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號(hào)：PZ12602）對(duì)化妝品樣品進(jìn)行凈化，再通過(guò)高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，建立了化妝品中丙酸氯倍他索的檢測(cè)方法，此方法的回收率及平行性良好，適合化妝品中丙酸氯倍他索的檢測(cè)。

1、實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1 儀器與試劑  

SPE1000 全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

4500質(zhì)譜系統(tǒng)，SCIEX公司；

E.T.氮吹濃縮儀，貨號(hào)：C020017，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號(hào)：PZ12602），北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

離心機(jī)，H1850，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司；

乙腈（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

甲醇（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司。

1.2 工作液配制

丙酸氯倍他索標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：100ug/mL，溶劑為甲醇，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心；

丙酸氯倍他索標(biāo)準(zhǔn)工作液：取100μL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10mL的容量瓶中，用40%乙腈水溶液定容，得到濃度為1.0μg/mL的標(biāo)樣工作液；

移取1.0μg/mL的苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)工作液0.05、0.1、0.2、0.4、0.8mL，分別置于1mL容量瓶中，用40%乙腈水溶液定容至刻度，得到濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

準(zhǔn)確稱(chēng)取化妝品樣品0.2g（精確至0.01g）于15mL塑料離心管中，加入3mL飽和氯化鈉溶液，渦旋混勻使樣品分散，準(zhǔn)確加入2mL乙腈，充分渦旋提取2min，5000r/min離心10min，吸出上層清液于50mL離心管中，下層氯化鈉溶液用2mL乙腈重復(fù)提取1次，合并2次乙腈提取液，在提取液中準(zhǔn)確加入40mL高純水，混勻，加入亞鐵氰化鉀溶液0.2mL，混勻，加入乙酸鋅溶液0.2mL，混勻，5000r/min離心10min，轉(zhuǎn)移出上清液待凈化。

1.3.2 固相萃取凈化

EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號(hào)：PZ12602）依次用5mL甲醇、10mL水活化，取1.3.1待凈化液上樣，上樣結(jié)束后用6mL10%乙腈水溶液淋洗萃取柱，再用4mL甲醇洗脫萃取柱，收集全部洗脫液，然后于E.T.氮吹濃縮儀（貨號(hào)：C020017）40℃下氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確吸取4mL水渦旋復(fù)溶0.5min，過(guò)微孔濾膜后供LC-MS/MS測(cè)定。

1.3.3 LC-MS/MS儀器條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

流動(dòng)相：A:0.1%乙酸水，B:0.1%乙酸乙腈（梯度洗脫程序見(jiàn)表1）；

流速：0.3mL/min；

進(jìn)樣量：1μL。

表1 梯度洗脫程序

2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 加標(biāo)回收率結(jié)果

表2 加標(biāo)回收率結(jié)果

2.2 加液色譜圖

圖1 標(biāo)液色譜圖

2.3 加標(biāo)樣品色譜圖

圖2 加標(biāo)樣品色譜圖

3、結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)展示了使用EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號(hào)：PZ12602）對(duì)化妝品中丙酸氯倍他索進(jìn)行凈化，通過(guò)高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，該方法的加標(biāo)回收率在77.8%~83.3%之間，RSD為2.6%，能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。說(shuō)明EZsep™HLB固相萃取柱（60mg/3mL，貨號(hào)：PZ12602）能很好的完成方法中的凈化工作，并且結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

4、參考文獻(xiàn)

《GB/T 24800.2-2009 化妝品中四十一種糖皮質(zhì)激素的測(cè)定》